中国医学科学院血液研究所血液病医院副所院长肖志坚教授

　　研究者首先构建了逆转录病毒过表达CALR-del52骨髓移植鼠模型，出现了血小板增多和巨核细胞高增生，重现了CALR突变MPN患者的巨核细胞特异性表型，同时也提示TPO受体（MPL）在突变体CALR导致的MPN的发病过程中起了关键性作用。

　　2013年12月，两项研究同时报道称，在无JAK2和MPL突变的原发性血小板增多症（ET）和原发性骨髓纤维化（PMF）患者中发现CALR基因突变，这是继2005年在BCR-ABL（-）MPN发现JAK2 V617F突变后的又一里程碑式的突破。此前有研究在lin-CD34+CD38-CD45RA-CD90+造血干细胞以及粒细胞巨噬细胞集落和红系集落中发现了突变CALR基因，证实该基因突变发生在多能干细胞。该研究证实单纯CALR突变足以导致MPN发生，其发病机制是突变型CALR与MPL结合激活JAK/STAT轴下游STAT信号。这无疑是MPN研究领域又一极具理论和潜在临床应用价值的长足进展。

　　为了证实MPL在突变型CALR启动癌发生中作用，研究者在IL3依赖的Ba/F3细胞中过表达CALR-del52，结果表明只在同时表达MPL，而非EPO受体 （EPOR）或G-CSF受体（GCSFR），才会转变为IL3非依赖性，表明突变型CALR的转化能力尤其需要MPL。

　　进一步的基因集富集分析肯定了突变体CALR转化的Ba/F3-MPL细胞显示Stat5和Stat3基因表达的强富集，同时发现这些细胞Stat5和Stat3的磷酸化存在差异。用shRNA介导的JAK2敲除，发现表达突变型CALR的Ba/F3-MPL细胞的IL3非依赖增殖下降，JAK2抑制剂芦可替尼可消除了Stat5和Stat3的差异激活。这些结果证实了突变型CALR信号是通过JAK/STAT轴MPL下游介导。

　　研究者发现，仅表达C端突变型或C端缺失的CALR均不能引起细胞因子非依赖性生长，表明这个新的C端是转化必须，但不是充分条件。因此，研究者在C端构建了一系列的截短型、结构域缺失和点突变质粒，并评估了它们的转化能力，却意外发现突变型CALR的致癌活性并非由某一特殊序列或结构域编码。免疫共沉淀分析表面，突变型CALR，而不是野生型CALR，与MPL物理结合，并且仅C端突变型或C端缺失的突变型CALR均不能与MPL结合，表明突变型CALR三聚体结构是同MPL结合是必须的。

　　综上，该研究证实与MPL结合是突变型CALR介导转化的关键，解析了CALR突变导致MPN的发病机制。

　　专家简介

　　肖志坚，教授，博士生导师，中国医学科学院血液研究所血液病医院副所院长，骨髓增生异常综合征（MDS）诊疗中心主任，实验血液学国家重点实验室副主任。主攻研究方向为髓系肿瘤，特别是MDS和MPN的发病分子机制和临床诊治新策略。“新世纪百万人才工程”国家级人选，获卫生部“有突出贡献的中青年专家”、国务院“政府津贴专家”和全国优秀科技工作者称号。