编者按：2023年6月8~12日，第28届欧洲血液学年会(EHA)将于德国法兰克福隆重召开，各国专家学者们群英荟萃，带来了精彩纷呈的最新研究进展。在血液检验领域，多参数流式细胞术（MFC）作为一项重要的临床检测方法，快速、简便、高效的方案是该技术发展的核心。来自河北燕达陆道培医院和北京陆道培医院的王卉教授的团队一项真实世界的研究(P588)入选了本次EHA，旨在介绍陆道培医院多年来的研究成果：一项快速简便高效的MFC检测和筛查恶性肿瘤及相关疾病的方案。为了深入了解该研究，《肿瘤瞭望》特邀王卉教授对该研究进行了深入解读和分析，现整理如下。

 

 

恶性肿瘤分为淋巴造血系统肿瘤和非造血系统肿瘤，多参数流式细胞术（MFC）已经成为这些恶性肿瘤的重要筛查和检测手段，此外病毒感染、免疫、遗传学异常等因素引起的粒细胞和淋巴细胞异常，如夜间阵发性睡眠性血红蛋白尿（PNH）、再生障碍性贫血（AA）、FCγ受体IIIβ缺陷等疾病，单克隆B细胞增多症（MBL）和意义未明单克隆球蛋白增多症（MGUS)等常见癌前病变，嗜血综合征和EBV相关淋巴细胞增殖、原发性免疫缺陷病(PIDs)等，都可以使用流式细胞术方法检测。但是目前检测方案过于差异化，阻碍了前处理设备现代化、分析模板化、人工智能等的发展，而现有的根据临床信息和形态学信息甚至过于简单的导向管法，都可能漏掉弱势克隆。因此有一个简便高效可以筛查和诊断绝大多数疾病的方案，可以提高效率，避免漏诊，并且促进规范化和智能化发展。

 

 

我们设计了一个7~9色五管一步法筛查和诊断绝大多数克隆性疾病方案（见表1）。

 

表1陆道培医院一步法诊断和筛查疾病的五管7~9色方案

备注：30岁以上选择2*，30岁以下选择2#。

 

使用BD公司3激光十色FACS canto plus或者lyric仪器，Diva软件，多参数设门分析。2020年9月只2021年6月，完成4995例检测，男性2690例，女性2305例，中位年龄48（0~94），BM标本4893例，PB标本102例。诊断MDS、MPN、MDS/MPN共计655例，AA 180例，AML 653例、T-ALL/LBL 51例，B-ALL/LBL 267例，MAPL 41例，MM149例，B-CLPD或者MBL293例，T-CLPD 72例，NK-CLPD 36例，转移癌15例，FCγ受体IIIβ基因突变7例，噬血综合征伴有免疫缺陷12例，PNH 22例，BPDCN 2例（图1）。使用同时进行的形态学、遗传学、临床表现等方法同步验证，并进行中位5个月（1~12个月）的随访。

 

图1 2020年9月只2021年6月，河北燕达陆道培医院检测的4995例病例分布。

 

图2一步法多参数流式细胞术5管7~9色检测方案

 

 

检测肿瘤细胞的灵敏度为10-4，覆盖率和特异性接近100%。假阳性率和假阴性率均接近0，恶性肿瘤病例中只有一例CD56阴性的上皮来源的转移癌不能覆盖，但是通过CD45/SSC找出非造血细胞，因为比例10%，未造成漏诊。虽然确定肿瘤后，部分需要加做抗体进行亚型诊断和明确诊断，主要是淋巴瘤、实体瘤和某些罕见疾病如恶性原始浆样树突状细胞肿瘤（BPDCN）、肥大细胞肿瘤等，但是与本院过去几年里类似euroflow方法的导向管加5~6个确定管的方案相比，需要得到相应诊断加做抗体的比例降低了23%（由原来40个抗体基础上平均需要再加做6.5%降低到5%）；完成同样多的标本检测，人力节约了33%；5~8年资人员进行初步分析诊断的两步法后再次需要附加检测抗体的几率由最初的5%~10%，降低到1%以下。由此可见本发明对于整个临床诊断领域来说，都是一个提高效率、节约成本、降低漏诊率的重要的检测与分析方案。

 

 

目前多色流式细胞术的发展，使方案逐渐趋同化，而我们设计的这套相对全面的一步法筛查和诊断方案，最大程度降低了漏诊率，提高了工作效率，促进自动化、标准化、规范化发展。

 

MFC是检测和筛查恶性肿瘤、癌前病变、遗传免疫等克隆性和遗传免疫相关疾病的重要工具，3激光8到10色机型可以达到灵敏度10-3～10-4，覆盖绝大多数异常。但是方案差异性导致该工作复杂，依赖人员经验，人才培养困难，难以规范化、自动化、智能化等，限制了该技术的发展。我们设计一个高效简便的方案，以及相应的软件分析方法，希望能够促进广大同行的检测工作，并为将来实验室规范化发展和人工智能奠定坚实的基础。